流式細(xì)胞儀是以流式細(xì)胞術(shù)為核心技術(shù)，集光學(xué)、電子學(xué)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、生物學(xué)、免疫學(xué)以及激光和計(jì)算機(jī)等多門學(xué)科和技術(shù)于一體的先進(jìn)科學(xué)技術(shù)設(shè)備。是現(xiàn)代科學(xué)研究中的先進(jìn)儀器之一，被譽(yù)為實(shí)驗(yàn)室的”CT”。流式細(xì)胞儀主要由液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、檢測(cè)分析系統(tǒng)三部分組成。部分儀器在電子系統(tǒng)中具有分選功能，通過對(duì)粒子進(jìn)行充電和偏轉(zhuǎn)，達(dá)到對(duì)細(xì)胞的分選并分析的目的。

　　操作步驟：

　　1.  單細(xì)胞懸液的制備：將1x105~1x107的細(xì)胞放入1.5 m l離心管中3000 r/min 離心5分鐘，棄上清；加入FACS緩沖液100 ul 懸浮細(xì)胞。

　　2.  封閉細(xì)胞表面Fc受體：在步驟1中加入Fc受體抗體0.5 ul（0.5 mg/ml），水浴3分鐘。

　　3.  細(xì)胞與熒光抗體結(jié)合：在步驟2中加入熒光抗體1 ul（0.5 mg/ml），水浴30分鐘。

　　4.  洗細(xì)胞去除游離的熒光抗體：在步驟3中加入FACS緩沖液350 ul，輕輕混勻，3000 r/min，離心5分鐘，棄上清，重復(fù)步驟（4）2次。

　　5.  上樣前處理：取100 ul 儀器緩沖液加入步驟（4）獲得的細(xì)胞沉淀中，輕輕混勻懸浮細(xì)胞，將細(xì)胞懸液移入FACS專用管中，準(zhǔn)備進(jìn)行儀器檢測(cè)和分析。

　　注意事項(xiàng)

　　1.  減少非特異熒光染色

　　（1）細(xì)胞的活性和狀態(tài)：流式細(xì)胞儀不但可探測(cè)細(xì)胞表面的熒光，也可探測(cè)細(xì)胞內(nèi)的熒光。因此，如果要檢測(cè)細(xì)胞表面的分子，一定要保證細(xì)胞的活性，還應(yīng)盡可能保持細(xì)胞靜止，通常在4度進(jìn)行操作。否則，熒光抗體進(jìn)入死細(xì)胞內(nèi)，會(huì)產(chǎn)生非特異結(jié)果。

　?。?）封閉抗體的應(yīng)用是bi不可少的，因?yàn)榇蠖鄶?shù)的免疫細(xì)胞表面都表達(dá)有Fc-R。細(xì)胞與抗體相互作用后，一定要用FACS緩沖液洗2~3次，以除去游離的抗體。

　　2.  單染色時(shí)以FCS常用，F(xiàn)ITC標(biāo)記抗體熒光比較穩(wěn)定而且價(jià)格合適。

　　3.  如果同時(shí)要檢測(cè)兩種以上的分子，一定要選擇不同波長(zhǎng)的熒光所標(biāo)記的抗體。

　　流式細(xì)胞儀是一種能夠探測(cè)和計(jì)數(shù)以單細(xì)胞液體流形式穿過激光束的細(xì)胞檢測(cè)裝置，由于在檢測(cè)中使用的細(xì)胞標(biāo)志示蹤物質(zhì)為熒光標(biāo)記物，因此，用來分離、鑒定細(xì)胞的流式細(xì)胞儀有被稱為熒光激活細(xì)胞分類儀，是分離和鑒定細(xì)胞群及亞群的一種強(qiáng)而有力的應(yīng)用工具。