用層析法，電泳法，免疫化學(xué)的方法對蛋白樣本進行分離或分析前通常需要先進行蛋白定量。用比色法進行蛋白定量分析的試劑通常分為兩類：一類是間接檢測法，即檢測與蛋白螯合后被還原銅離子；另一類是直接檢測法，即使用與蛋白結(jié)合的染料，檢測樣品中顏色的變化。所有的檢測方法都要適用于應(yīng)用的適用性。每種檢測方法都有它的局限和優(yōu)勢，出于復(fù)雜的研發(fā)需要，以G-Biosciences公司為代表的生物科技公司開發(fā)出了多種蛋白定量試劑盒。這些試劑都是熟悉的、穩(wěn)定的方法，并且能夠提供一致可靠的結(jié)果，包括增強的染料結(jié)合蛋白定量，基于銅離子的蛋白定量，創(chuàng)新的測試條和點蛋白定量?？傮w而言，這些方法代表了目前的比色法檢測和總蛋白定量的技術(shù)水平。

四大金剛之-BCA蛋白定量

BCA蛋白定量法是一種快速靈敏、穩(wěn)定可靠的蛋白定量測定方法, 也叫史密斯分析定量，和去污劑溶解的蛋白溶液都是兼容的。

BCA蛋白定量法基于2個反應(yīng)。首先，蛋白樣品中的肽鍵還原二價銅離子為一價銅離子，這是一個溫度依賴的反應(yīng)。被還原銅離子的量和溶液中的蛋白的量成正比。下一步，Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，測定其在562nm處的吸收值，在0.02-2mg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。 

BCA蛋白定量分析適合在 1ml比色皿或微孔板的蛋白溶液定量。試劑盒可以提供傳統(tǒng)的BSA蛋白標(biāo)準(zhǔn)物或非動物蛋白標(biāo)準(zhǔn)物。對于稀釋的低濃度的蛋白樣品（0.5-20µg/ml），筆者推薦使用微量BCA蛋白定量分析試劑盒。對于含有還原劑的樣品，推薦你使用BCA-還原劑兼容型蛋白定量分析試劑盒。

BCA的優(yōu)勢是：

l 靈敏度高的顯色檢測

l 蛋白濃度檢測范圍20-2,000µg/ml

l 與多數(shù)離子和非離子型去污劑兼容

l 方便的微孔板和1ml比色皿檢測形式

四大金剛之-CB-X蛋白定量

對于科研人員來說，從市場上大量的蛋白定量產(chǎn)品中選擇可以和自己的樣本兼容的試劑盒是一個難題。CB-X蛋白定量分析試劑盒解決了這個難題，因為它和常規(guī)使用的緩沖液以及蛋白分離，儲存盒檢測的條件都是兼容的。

對于簡單不復(fù)雜的水質(zhì)緩沖液蛋白樣本，CB-X是一個高度靈敏的，單個試劑的檢測，5分鐘可以完成實驗。CB-X蛋白定量分析試劑盒使用一個改進版的考馬斯亮藍染料。

對于復(fù)雜的蛋白樣本，CB-X蛋白定量分析試劑盒帶有能夠去除干擾準(zhǔn)確蛋白定量的試劑和化學(xué)品從而來回收樣本的必需試劑。這些干擾試劑包括去污劑，離液劑，還原劑，烷化劑，糖，高鹽濃度，緩沖液試劑，螯合劑。去雜回收步驟和隨后的蛋白定量分析實在同一個管中完成保證沒有蛋白的丟失和蛋白定量的準(zhǔn)確性。

如果這個蛋白樣本不包含干擾試劑可以直接進行單個試劑定量分析同時可以得到一個線性反應(yīng)。如果干擾試劑存在或者產(chǎn)生人為的結(jié)果這時蛋白樣本可用去雜回收試劑進行一步處理，然后進行蛋白定量來產(chǎn)生線性的反應(yīng)。

CB-X蛋白定量分析試劑盒同時提供一個批次特定性的CB-X查詢表格，這可以讓科研人員進行單個蛋白的回收，然后定量，之后在CB-X查詢表格上通過吸收值來得到蛋白的濃度。CB-X查詢表格消除了所需要的蛋白標(biāo)準(zhǔn)，節(jié)省的大量的時間和精力。CB-X查詢表格是通過復(fù)雜的蛋白混合物制成，和來自于哺乳動物，植物，細菌和酵母的蛋白數(shù)據(jù)可以很好的吻合。一套牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)物一起提供，當(dāng)科研人員單獨使用CB-X染料，或者他們傾向于得到自己的標(biāo)準(zhǔn)曲線或得到在自己特定的試驗下的CB-X查詢表格時，這套標(biāo)準(zhǔn)物用于產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線。CB-X蛋白定量分析試劑盒在每個檢測0.5-50微克的時候是非?？煽康?。試劑盒包含足夠的CB-X檢測染料來進行500次蛋白定量以及足夠的回收試劑用于250次回收。

CB-X檢測的優(yōu)勢：

l 0.5-50微克的線性反應(yīng)

l 迅速沉淀和顏色反應(yīng)

l 效期長，可以有12個月穩(wěn)定保存

l 高度的可靠性和重復(fù)性

四大金剛之-RED 660蛋白定量

去污劑和還原劑兼容的蛋白定量

RED 660蛋白定量檢測是基于一種試劑的顯色反應(yīng)，它的效果要優(yōu)于其他商業(yè)化的顯色反應(yīng)定量檢測，包括Bradford和增強的Coomassie/ Bradford定量檢測。RED 660蛋白定量檢測為您帶來更好的線性，更好的顏色穩(wěn)定性，以及和考馬斯法相比對于去污劑，還原劑和其他干擾試劑更好的兼容性。這種單個的即用的試劑可以為您迅速分析總蛋白濃度和產(chǎn)生高度可重復(fù)性的結(jié)果。

這種檢測適用于簡單和快速的蛋白定量，可以檢測蛋白濃度在50-2000μg/ml的濃度范圍內(nèi)。

這種檢測是基于單個染料金屬復(fù)合物試劑。蛋白和染料金屬復(fù)合物的結(jié)合是在酸性的條件下從而產(chǎn)生顏色的變化，從紅棕色變?yōu)榫G色，顏色密度的變化和蛋白濃度呈正比，顏色的變化是染料金屬復(fù)合物在低PH值下去質(zhì)子化的結(jié)果，這個過程通過和正電荷的氨基酸基團反應(yīng)下完成的。蛋白定量可以使用少至0.5微克的蛋白，蛋白染料復(fù)合物可以在5分鐘內(nèi)達到反應(yīng)終點，同時可以在幾天內(nèi)保持穩(wěn)定。

RED 660蛋白定量試劑盒提供500個標(biāo)準(zhǔn)檢測或者2500個標(biāo)準(zhǔn)微孔檢測。RED 660蛋白定量試劑盒和大部分去污劑兼容，它的兼容性可以被Neutralizer™進一步增強。Neutralizer™是一種*的化學(xué)物質(zhì)，它能夠隔絕離子去污劑，包括SDS，使溶液和RED 660蛋白定量試劑兼容。Neutralizer™也可以和Laemmli上樣緩沖液一起使用。

對于蛋白定量的干擾

兼容于RED 660蛋白定量的試劑以及這些試劑在標(biāo)準(zhǔn)檢測種所接受的濃度被列了出來。在大部分情況下使用一個校準(zhǔn)的空白對照可以消除或減少由干擾試劑所導(dǎo)致的錯誤。

*表明這種試劑和RED 660蛋白定量一起使用所接受的濃度是配套Neutralizer™一起使用。

RED 660蛋白定量優(yōu)勢：

l 迅速，單個試劑檢測

l 兼容性好，和一系列去污劑和還原劑兼容

l 線性好，和其他蛋白定量方法相比有更好的線性標(biāo)準(zhǔn)曲線

四大金剛之-Non-Interfering™（NI）無干擾蛋白定量

保證蛋白定量不受干擾試劑的影響。

一種高度靈敏的，顯色法的蛋白定量方法，這種檢測克服了常規(guī)實驗室試劑存在于蛋白溶液中對蛋白定量的干擾，同時顯示出最小的蛋白和蛋白之間的檢測波動性。

這種定量方法不受常規(guī)實驗試劑存在的影響，比如還原劑，螯合試劑，去污劑，氨試劑，糖，離液劑，鹽類，藥物，抗體，鈷和其他常規(guī)實驗室試劑。NI蛋白定量法由兩步組成。

通用蛋白沉淀試劑(UPPA™)加到蛋白溶液中來迅速沉淀總蛋白。蛋白通過離心得到固定以及干擾試劑在上清液中從而被丟棄。

蛋白濃度得到定量通過和堿性銅離子溶液進行混合，銅離子結(jié)合到肽的主鏈上，定量檢測未結(jié)合的銅離子。檢測和蛋白的側(cè)鏈無關(guān)從而使蛋白之間的波動性可以最小化。顏色深度和蛋白的量成反比。

Non-Interfering™（NI）無干擾蛋白定量優(yōu)勢：

l 線性反應(yīng)0.5μg-50μg蛋白

l 少量樣本即可，只需1-50μl

l 不受非蛋白化學(xué)品和試劑的影響

l 實驗時間，大約30分鐘

l 產(chǎn)品效期長，可以存放一年

常用的蛋白定量產(chǎn)品的選擇：

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